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NuclecutTM GMP級全能核酸酶
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GMP-RA-NC01-A
10KU
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GMP-RA-NC01-B
50KU
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500KU
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產品概述

背景:  

       在生物制品的制備/生產過程中,去除DNA殘留是極為重要的。在過去幾年里,重組蛋白類生物藥物的發展突飛猛進,并且在未來依然前景廣闊。在微生物系統中,這些重組蛋白一般都是通過微生物的發酵,并且通過裂解微生物細胞而釋放出來。然而,在釋放出目標產物的同時,細胞裂解物會同時產生一些雜產物,比如宿主細胞蛋白、核酸(DNA以及RNA)、細胞內毒素以及一些其他宿主細胞雜質。重組蛋白藥物、病毒疫苗等生物制品中的DNA殘留可能會給患者體內帶入激活的致癌基因,或者作為潛在的感染病毒DNA致使患者被感染。因此,DNA殘留量是重組蛋白藥物的一個重要的評價標準。世界上許多權威機構都對重組蛋白類藥物中的宿主DNA殘留量做出了嚴格的規定,對于每支疫苗中的DNA殘留量,WHO規定不可以超過l0ng,美國FDA規定不可以超過10pg,我國規定100pg以下。

概述:

       NuclecutTM全能核酸酶(SuperNuclease)是一種核酸內切酶,可將核酸降解成2~5個堿基的5'-單磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(雙鏈,單鏈,線狀,環狀)的DNARNA而沒有蛋白裂解活性,因此被稱為全能核酸酶。全能核酸酶可以非特異性裂解單鏈以及雙鏈的DNARNA,并切割出一個3'-OH5'-磷酸基(如圖1),主要用于重組蛋白、病毒疫苗、細胞和基因治療用病毒載體、溶瘤病毒及其它生物制品中DNA/RNA去除。該酶在0~42℃的均有活性,最適溫度為37℃。有效的pH范圍為6.0-10.0,最適pH8.0。發揮活性需要Mg2+存在,1-2mM為最佳。在去污劑、SDS、尿素等存在下仍然保持一定活性。



1. 全能核酸酶的作用位點

產品包裝:

       NuclecutTM GMP級全能核酸酶(SuperNuclease-GMP)包裝規格如下:

目錄號
規格

GMP-RA-NC01-A

10KU
GMP-RA-NC01-B

50KU

GMP-RA-NC01-C

500KU


      






       產品儲存于20mM Tris-HCI,pH8.0,2mM MgCl2,20mMNaCl50%v/v)甘油中,不添加防腐劑。

產品來源:

       NuclecutTM GMP全能核酸酶序列來源于Serratiamarcescens,重組表達于E. coli,單體理論分子量約27.5KD,C端帶6×His標簽。

產品特性:

       全能核酸酶可非特異性降解所有形式的DNARNA(單鏈的、雙鏈的、線性的和環化的),將核酸完全消化為長度為35個堿基的5'-單磷酸末端寡核苷酸。

       NuclecutTM GMP級全能核酸酶采用非動物源性原料, 不添加抗生素,符合GMP生產標準,滿足法規要求。適用于重組蛋白、病毒疫苗、細胞和基因治療用病毒載體、溶瘤病毒及其它生物制品中DNA/RNA去除。

產品質量:

       1. 高活性:≥1.1×106U/mg 蛋白、≥250U/μl;

       2. 高純度:通過SDS-PAGE檢測,純度≥95%;通過 SEC-HPLC分析確定,純度 ≥99 %;

       3. 無蛋白酶活性:偶氮酪蛋白法分析無蛋白酶活性;

       4. 內毒素:由重組C因子法確定每1000 U核酸酶內毒素含量< 0.01 EU;

       5. 微生物檢測:< 10 CFU/1×106U。

儲存條件:

       采用干冰運輸,收到產品后請立即將其置于-20℃保存。

應用:

       1. 可從重組蛋白及其它生物制品中去除DNA/RNA

       2. 適用于病毒疫苗、細胞和基因治療用病毒載體及溶瘤病毒的純化

       3. 降低由核酸引起的粘度;

       4. 在二維凝膠電泳和色譜中制備樣品

       5. 防止細胞結塊,尤其是冷凍細胞

       6. 降低哺乳動物細胞提取物的粘度

       7. 降低大腸桿菌細胞裂解液的粘度以增強過濾性

       8. 從包涵體中純化蛋

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常見問題

若需要其它包裝規格,是否可以接受定制?
可以。若需GMP條件下生產的藥用級大包裝,請咨詢客服電話0512-87663137,或發送電子郵件至techserv@rhinobio.com。

什么樣的質量/數量的酶對特定的應用是足夠的?
有幾個參數如溫度及酶切體系會影響酶的活性,因此最佳條件將因工藝而異,需要通過實驗來確定。

實驗過程中,我需要在哪一步加入全能核酸酶?如果在低溫下工作,需要添加多少全能核酸酶?
這取決于使用全能核酸酶的目的,但一般情況下,酶的添加最好是在培養后和捕獲步驟之前。
在溫度低于37℃時,酶的效率降低,補償這種效率下降所需的量因過程而異,并取決于現有的其他參數。通常,增加另一個參數,如孵育時間,可以在不需要增加酶用量的情況下進行補償。

為什么全能核酸酶作用后沒效果?什么會抑制其活性?
全能核酸酶活性范圍較廣,而1-2mM Mg2+的濃度對全能核酸酶的活性至關重要。
Mn2+可以替代Mg2+;在Mg2+的存在下,酶活性達到最佳。一價陽離子濃度>300mM,磷酸鹽濃度>100mM,以及硫酸銨濃度>100mM都會抑制約50%的活性。此外,>1mM EDTA濃度也會抑制全能核酸酶的活性。

酶活降低是為什么?
全能核酸酶通常非常穩定,然而在極少數情況下,會導致活性喪失??赡茉蛴校?/span>
1)不可逆失活可能是由于樣品中存在變性劑或蛋白酶,或是存儲不當。
2)可逆失活通常是由于螯合劑的存在,如EDTA,它可以螯合去除活性必需的鎂離子。

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