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NuclecutTM 全能核酸酶
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10KU
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產品概述

背景:  

       在生物制品的制備/生產過程中,去除DNA殘留是極為重要的。在過去幾年里,重組蛋白類生物藥物的發展突飛猛進,并且在未來依然前景廣闊。在微生物系統中,這些重組蛋白一般都是通過微生物的發酵,并且通過裂解微生物細胞而釋放出來。然而,在釋放出目標產物的同時,細胞裂解物會同時產生一些雜產物,比如宿主細胞蛋白、核酸(DNA以及RNA)、細胞內毒素以及一些其他宿主細胞雜質。重組蛋白藥物中的DNA殘留可能會給患者體內帶入激活的致癌基因,或者作為潛在的感染病毒DNA致使患者被感染。因此,DNA殘留量是重組蛋白藥物的一個重要的評價標準。世界上許多權威機構都對重組蛋白類藥物中的宿主DNA殘留量做出了嚴格的規定,對于每支疫苗中的DNA殘留量,WHO規定不可以超過l0ng,美國FDA規定不可以超過l0pg,我國規定為l00pg以下。 

       NuclecutTM 全能核酸酶(SuperNuclease),是一種核酸內切酶,可將核酸降解成2~5個堿基的5'-單磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(雙鏈,單鏈,線狀,環狀)的DNA和RNA而沒有蛋白裂解活性,因此被稱為“全能核酸酶”。全能核酸酶能有效降低蛋白樣品粘度,去除蛋白樣品中核酸的污染,且無蛋白酶活性殘留,NuclecutTM 全能核酸酶活性達1×106U/mg蛋白。全能核酸酶在降低粘性的同時,也具有多種其他用途,如:減少了樣品處理時間、增加了蛋白產量、離心時沉淀和上清分離的更徹底、更便于溶液的離心(尤其是超濾)、提高色譜純化的效率等。

概述:

       該酶在0~42℃的均有活性,最適溫度為37℃;有效的pH范圍為6.0-10.0,最適pH為8.0;發揮活性需要Mg2+存在,1-2mM為最佳;在去污劑、SDS、尿素等存在下仍然保持一定活性。全能核酸酶可以非特異性裂解單鏈以及雙鏈的DNA和RNA,并切割出一個3'-OH和5'-磷酸基。

產品包裝:

       NuclecutTM 全能核酸酶(SuperNuclease)包裝規格如下:

目錄號 規格
RA-NC01-A
10KU
RA-NC01-B
50KU
RA-NC01-C
500KU

       產品儲存于20mM Tris-HCI,pH8.0,2mM MgCl2,20mM NaCl和50%(v/v)甘油中,不添加防腐劑。

產品來源

       NuclecutTM 全能核酸酶序列來源于Serratia marcescens,重組表達于E. coli,單體理論分子量約27.5KD,C端帶6×His標簽。

產品特性

       NuclecutTM 全能核酸酶可非特異性降解所有形式的DNA和RNA(單鏈的、雙鏈的、線性的和環化的),將核酸完全消化為長度為3至5個堿基的5'-單磷酸末端寡核苷酸。

產品質量

       1. 高純度:通過SDS-PAGE檢測,純度≥90%;

       2. 高穩定性:每批產品都經過嚴格的質量控制,以實現產品批間穩定性。

       3. 無蛋白酶活性:偶氮酪蛋白法分析無蛋白酶活性。

      

儲存條件:

       采用干冰運輸,收到產品后請立即將其置于-20℃保存。復溶后可適當分裝以減少多次凍融帶來的活性損失。

應用:

       1. 從蛋白質和其他生物制劑中去除DNA / RNA;

       2. 降低由核酸引起的粘度;

       3. 在二維凝膠電泳和色譜中制備樣品;

       4. 防止細胞結塊;

       5. 降低哺乳動物細胞提取物的粘度;

       6. 降低大腸桿菌細胞裂解液的粘度以增強過濾性。

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常見問題

什么樣的質量/數量的酶對特定的應用是足夠的? 
有幾個參數如溫度及酶切體系會影響酶的活性,因此最佳條件將因工藝而異,需要通過實驗來確定。

實驗過程中,需要在哪一步加入全能核酸酶?如果在低溫下進行酶切,需要添加多少全能核酸酶?
這取決于使用全能核酸酶的目的,但一般情況下,酶的添加最好是在培養后和捕獲步驟之前。
在溫度低于37℃時,酶的效率降低,補償這種效率下降所需的量因過程而異,并取決于現有的其他參數。通常,增加另一個參數,如孵育時間,可以在不需要增加酶用量的情況下進行補償。

為什么全能核酸酶作用后沒效果?什么會抑制其活性?
全能核酸酶活性范圍較廣,而1-2mM Mg2+的濃度對全能核酸酶的活性至關重要。
Mn2+可以替代Mg2+;在Mg2+的存在下,酶活性達到最佳。一價陽離子濃度>300mM,磷酸鹽濃度>100mM,以及硫酸銨濃度>100 mM都會抑制約50%的活性。此外,>1mM EDTA濃度也會抑制全能核酸酶的活性。

酶活降低的原因是什么?
全能核酸酶通常非常穩定,然而在極少數情況下,會導致活性喪失??赡茉蛴校?/span>
1)不可逆失活可能是由于樣品中存在變性劑,如蛋白酶;或者是存儲不當。
2)可逆失活通常是由于螯合劑的存在,如EDTA,它可以螯合去除活性必需的鎂離子。
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